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    【实验报告】 bf88必发网 2017-07-12本文已影响

    篇一:培养基的制备与灭菌实验报告(详细)

    一、实验题目:培养基的制备与灭菌

    二、实验目的:

    1、明确培养基的配置原则,掌握配置方法。

    2、了解灭菌的原理,学习掌握灭菌器的使用方法。

    三、实验器材:

    1、药品:牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。

    2、仪器:三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。

    四、实验原理:

    1、培养基的制备

    包括一下几种成分:

    (1)水分:主要成分。

    (2)N源:包括无机氮和有机氮。

    (3)C源:主要是含碳有机物、碳氢化合物等。

    (4)无机盐:如NaCl、KH2PO4等。

    微量元素:Cu、K、Mg、S、P、Zn。

    有些还需要添加“生长因子”,通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。

    2、培养基配置的原则

    根据不同的培养对象及培养目的,选用不同的培养基,但有机物总量不得超过15%,盐类一般不超过1%。

    培养基有以下分类:

    按成分:天然培养基、合成培养基、半合成培养基

    按状态:固体培养基、半固体培养基、液体培养基

    按用途:基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基

    培养基配好后应立即灭菌,防止营养物质中的微生物富集。

    3、灭菌:

    用理化手段杀灭一切微生物的营养体,包括芽孢和孢子,在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。

    (1)高压蒸汽灭菌:将物品放入封闭的加压灭菌器,加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽,将冷空气排尽,压力上升,使水沸点变高,导致菌体蛋白质变性,一般0.1MPa、121℃、15~30min可以彻底灭菌,本次实验灭菌20min。若是含糖培养基,110℃、30min。

    (2)干热灭菌:微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。因高温,所以含水量小,不利于蛋白质受热变性,所以温度高,时间长。

    (3)紫外灭菌:诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DNA复制。

    (4)过滤除菌:实验室中用微孔滤膜(孔径一般为0.22μm)。除病菌需更小。

    五、实验步骤:

    1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备

    依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gNaCl放入烧杯,加入100mL水,用玻璃棒搅匀溶解,移入三角瓶,并加入1.5g琼脂。加上棉塞,迅速拔出能发出清脆声响即可,用报纸包住并系好麻绳。

    2、包移液管和培养皿

    (1)包一包培养皿(一包五个):用手压紧、塞好,折出棱角,包好后摇晃没有培养皿相互碰撞的声音即可。

    (2)包2支移液管:用棉花塞好移液管尾部,露出1~2cm即可。取长条报纸,一端折

    90°角,紧密严实沿30°角卷好移液管,尾部叠好防止散开。

    3、高压蒸汽灭菌

    (1)灭菌前要先看水位是否合适。

    (2)将包好的待灭菌物品放入内层锅,不要装得太挤,棉塞不应染上培养基。

    (3)加盖,两两对称旋紧螺栓。

    (4)设定条件:0.1MPa、121℃、20min,进行加热。

    (5)先打开排气阀,待空气排尽后,关上排气阀。

    (6)结束后,自然降温,压力降为0后,打开排气阀取出物品。

    4、干热灭菌

    (1)将包好的待灭菌物品放入电热干燥箱内,关好门箱。

    (2)设定条件:160~170℃,恒温2h。

    (3)结束后,切断电源,自然降温,降到70℃以下后开箱取物。

    六、思考题:

    1、你配制的是什么培养基?

    选择培养基。

    2、选择培养基与鉴别培养基的区别?这两种培养基的应用情况。

    选择培养基是指根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。其功能是使混合菌样中的劣势菌变成优势菌,从而提高该菌的筛选效率。如以纤维素作唯一碳源的培养基可分散到分解纤维素的微生物分散酵母菌或霉菌时,可添加适量的青霉素、四环素或链霉素,以抑制细菌和放线菌的生长。

    鉴别培养基是在成分中加入有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂,从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便地从近似菌落中找到目的菌菌落的培养基,此类培养基一般用于鉴定不同微生物。如EMB即伊红美乳糖造就基。大肠杆菌分解乳糖产生大量混合酸,可染上酸性伊红,伊红和美兰结合,菌落被染成深紫色,从菌落外貌的发射光中还可以看到绿色金属发光。

    篇二:微生物实验报告

    学号:

    微生物学大实验班级: 姓名:

    1.培养基的配置及消毒灭菌

    1.1通用培养基的配制(液体、固体、半固体三种)

    1.1.1实验目的

    (1)了解配制微生物培养基的原理和培养基的种类。

    (2)掌握配制微生物通用培养基的一般方法和操作步骤。

    1.1.2实验原理

    培养异养细菌最常用的培养基是牛肉膏蛋白胨培养基,它是一种天然培养基。牛肉膏是牛肉浸液的浓缩物,含有丰富的营养物质,它不仅能为微生物提供碳源、氮源,还含有多种维生素。蛋白胨是酪蛋白、大豆蛋白或鱼粉等经蛋白酶水解后的中间产物,含有?、胨和氨基酸等丰富的含氮素营养物,因此完全能满足大多数异养细菌对营养的需要。

    1.1.3材料和器皿

    (1)试剂:牛肉膏、蛋白胨,NaCl,1mol/LNaOH,1mol/L HCl。

    (2)器皿:台秤,玻璃烧杯,搪瓷烧杯,三角瓶,量筒,漏斗,试管,玻璃棒等。

    (3)其他:pH试纸,牛角匙,牛皮纸,棉花,纱绳,灭菌锅等。

    1.1.4方法和步骤

    1.配制牛肉膏蛋白胨培养基

    (1)配方及配量:牛肉膏1.5g,蛋白胨5g,NaCl2.5g,琼脂(固体6g 半固体

    0.4g 液体不加)蒸馏水500ml

    (2)称取药品:按照营养基配方与配量分别称取各药品,取少于总量的水于烧杯

    中,将培养基成分(琼脂除外)逐一加入水中待溶。

    (3)加热溶解:将烧杯放在石棉网上,用文火加热,并不断用玻璃棒搅拌,使各

    药品快速溶解,然后补水至500ml。

    (4)调节pH:用1mol/l NaOH 调pH至7.2—7.4.避免调过碱,应缓慢加入,边

    加入边搅拌,并用pH试纸测酸碱度值。

    (5)分装:将配制好的培养基分装到相应的玻璃器皿中,并在固体和半固体培养

    基中加入琼脂,贴好标签,待灭菌。

    1.2加压蒸汽灭菌法

    1.2.1实验目的

    懂得加压蒸汽灭菌原理及其安全使用的注意事项。

    1.2.2实验原理

    以加热密封锅体内的水和水蒸气的压力来提高锅体内蒸汽温度而达到对物品灭菌的目的。

    1.2.3方法和步骤

    (1)加水:取出装料桶,往锅内加水至与搁架圈同样高度为止。

    (2)装料:将待灭菌的物品放入装料桶内并放回锅。

    (3)加盖

    (4)排气:在水煮沸后,以蒸汽驱赶锅内的空气沿排气软管从排气阀中溢出,待空气排尽后,才可关闭气阀继续加热。

    (5)升压、保压、降压

    (6)取料

    1.2.4注意事项

    (1)注意检查锅体和锅盖上的部件是否完好,并严格按照操作程序进行,避免发生各类意外事故。

    (2)灭菌时切勿擅自离开岗位,要注意压力表指针动态;要按培养基中的营养成分的耐热程度来设置合理的灭菌温度与时间,以免营养成分过多被破坏。

    (3)务必待锅压下降到零后再打开排气阀和锅盖,否则因锅内压力突然下降,使瓶装培养基或其他液体因压力瞬时下降而发生复沸腾,从而造成瓶内液体沾湿棉塞或溢出等事故。

    (4)在放入灭菌料桶前,切记应往锅体内加入适量的水,若锅体内无水或水量不够等均会造成在灭菌时引发重大事故。

    2. 大肠杆菌的接种方法(穿刺接种法和液体接种法)

    2.1穿刺接种法

    2.1.1实验材料目的

    掌握穿刺接种法并观察细菌在半固体培养基中的运动力。

    2.1.2实验原理

    穿刺接种法就是用接种针挑取少量菌苔,直接刺入半固体直力柱培养基中央的一种接种法。

    2.1.3方法和步骤

    1、接种前准备

    (1)标明菌名 (2)旋松棉塞 (3)点燃酒精灯

    2、穿刺接种法(直握法)

    (1)挑取菌种:在超净台中,酒精灯旁,左手持菌种管,右手拿接种针,经火焰灭菌后,用持针的右手拔出试管塞,试管口过火灭菌后再将接种针伸入菌种管中,现在斜面上端冷却后挑取少量菌苔,移出接种针,管口再过火,塞上塞子,将菌种管放回试管架上。

    (2)刺穿接种:左手拿直立柱试管,在火焰旁用右手的小指和掌边拔出塞子。随之将试管口朝下,同时将接种针从直立柱培养基中央自下而上直刺到离管底

    1-1.5cm处(切勿穿透培养基),然后沿原穿刺线拔出接种针。管口过火,塞上塞子,插在试管架上。

    (3)灭接种针上的残菌:将带有菌的接种针在火焰上烧红,经灭菌后才可以放在桌面上。随手再将塞子塞紧,以防脱落。

    3、培养

    将已接种的直立柱试管置37℃恒温箱中,培养24h后取出,通过透射光目测细菌在穿刺线上的生长情况,并记录结果。

    4、接种后处理

    (1)清洗:将废弃的菌种管塞子拔去,置水浴中煮沸20min,然后刷洗干净,倒置于试管架上,沥干。

    (2)整理:清理桌面。

    2.1.4实验结果

    结果总体上来说算不错,穿刺线形状如玻璃棒,有扩散现象;边缘不整齐,这说明了大肠杆菌有鞭毛,可运动。

    2.1.5注意事项

    (1

    )半固体培养基琼脂的用量依据琼脂牌号不同而定的。其硬度的判断,以培养

    基冷却凝固后,用手轻敲即碎为准。为使培养基透明而不浑浊,配置的培养基必须过滤。

    (2)接种前应该将接种针拉直,穿刺时手要平稳,不可左右摆动。

    (3)穿刺接种时,接种针不可穿透培养基。

    2.2液体接种法

    2.2.1实验目的

    掌握利用各种接种工具进行液体接种的步骤及方法。

    观察细菌在液体培养时的群体特征。

    2.2.2实验原理

    在无菌操作条件下,用无菌的接种环、滴管、移液管或移液枪等接种工具将斜面菌种或菌种悬液移接到液体培养基中的一种方法。在定量接种时可用移液管进行。

    2.2.3方法与步骤

    接种环接种

    1、接种前准备

    (1)标明菌名 (2)旋松棉塞 (3)点燃酒精灯

    2、接种操作要点

    左手持试管,右手拿接种环,在火焰上灭菌后,将接种环伸入菌种管中,现在斜面上端冷却后挑取少量菌苔转移到试管的新鲜培养液中,让接种环在液面和管壁的交界处反复摩擦及振荡,以洗下环上的菌体,使其均匀分散入培养液中,然后移出接种环,塞上塞子,并立即烧去环上的菌体。

    3、混匀培养液:用拇指和中指捏住试管的上部,食指摁住塞子,将试管底部在左手手掌心上轻拍振荡,使成团的细菌细胞与培养液充分混匀。

    4、适温培养:将试管插于试管架上,置于37℃恒温箱中,培养24h后取出,观察细菌在液体培养基中的生长特征,并记录结果。

    2.2.4实验结果

    没摇动前,液面微浑浊,有一层菌膜覆盖,

    且管底有大量菌体沉淀,摇动后观察到液体有絮状

    浑浊。

    篇三:微生物学实验报告

    微生物学实验报告

    实验一 普通光学显微镜的使用及细菌染色与形态观察

    第一部分:显微镜的使用

    一、目的要求

    1.熟悉普通光学显微镜的构造、油镜的使用原理和显微镜的维护方法。

    2.学会正确使用油镜观察细菌的基本形态和特殊构造。

    3.了解各种显微镜的主要特征。

    二、实验原理

    (一)光学显微镜的构造

    微生物实验室中最常用的是普通光学显微镜,它的构造可分为机械部分和光学部分。

    1、机械部分

    普通复式光学显微镜的机械部分通常包括以下几个部分:目镜、镜筒、基座回转器、物镜、载物台、光圈、聚光器、光源、镜臂、细调节器、粗调节器等。

    2、光学部分:目镜、物镜、聚光器、光圈、光源。

    (二)放大倍数

    标本首先经物镜放大,在目镜的焦距平面上形成一个实像,再经过目镜放大成最终的虚像。总的放大倍数是物镜放大倍数与目镜放大倍数的乘积。 物镜的放大倍数愈大,其工作距离(物镜镜头到标本片之间的距离)愈短,这时光圈就要打开得愈大。

    显微镜的性能受物镜的分辨距离或分辨力所限制。分辨距离即透镜所能分辨的两个物点之间的最小距离,分辨距离愈小,透镜的分辨力愈高,物像也就愈清晰。因此常以分辨距离来衡量显微镜的分辨力。

    R=0.61λ/N.A

    式中:R-----分辨距离;

    λ------作用光的波长;

    N.A------数值口径。

    一些介质的折射率

    介 质

    空气

    玻璃

    香柏油 折射率 1 13 55 1.56

    三、实验内容

    (一) 材料:显微镜,香柏油,擦镜纸。

    (二) 方法:

    细菌很小,须使用油镜方可观察到。油镜是显微镜上最重要的部件之一,观察时与玻片非常接近,稍不小心即可压碎玻片,更严重的是损坏镜头,故必须极其仔细地学习油镜的使用方法:

    1、为使低倍镜取得最适之光源,可将低倍镜头调节到离载物台约1cm的高度,将聚光器提高,光圈完全打开,然后调节电压旋钮至视野最合适。

    2、 滴一滴香柏油,固定于载物台上,用推动器调节到载物台正中。在双目侧视下,下旋粗调节器,使油镜头浸入油中几乎与标本片相接触。然后眼睛从目镜观察(如光线不足,可适当增大电源电压),徐徐上旋粗调节器至看到模糊物像之后,再用细调节器调节以使物像清晰。如镜头已离开油面还未看到物像,则再重新操作。

    3、更换标本时应先提高油镜头,再更换玻片,切勿随意移动显微镜的位置。

    4、油镜观察完毕后,按“显微镜保护”中(6)项处理。

    5、最后将油镜各部分还原,聚光器下降,反光镜垂直于镜座,镜头转成八字形,以免与聚光器发生碰撞。

    四、思考题

    1、使用显微镜时为何调节下列构造?反光镜,光圈,聚光器,粗调节器,细调节器,镜头回转器。

    答:聚光器的位置之升降可影响视野的明亮度,上升则视野明亮,下降则光线减弱。光圈的放大或缩小也可控制视野明亮程度。粗调节器和细调节器均是调节焦距的装置。镜头回转器为装置物镜和转换物镜之用。

    2、使用不同放大倍数的物镜时,工作距离与光圈的关系。如何利用这一原理用好显微镜?

    答:物镜的放大倍数愈大,其工作距离(物镜镜头到标本片之间的距离)愈短。标本首先经物镜放大,在目镜的焦距平面上形成一个实像,再经过目镜放大成最终的虚像。总的放大倍数是物镜放大倍数与目镜放大倍数的乘积。

    3、为何要选用与玻璃折射率相似的香柏油作为油镜的介质?油镜的原理是什么?

    答:香柏油只在使用油镜头时(100倍物镜)使用,因为当镜与装片之间的介质为空气时,由于空气(n= 1.52)的折射率不同,光线会发生折射,不仅使进入物镜的光线减少,降低了视野的照明度,而且会减少镜口角。当以香柏油(n=1.515)为介质时,由于它的折射率与玻璃相近,光线经过载玻片后可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射,不仅增加了视野的照明度,更重要的是通过增加数值孔径达到提高分辨率的目的。可见光的波长平均为0.55μm。当使用数值孔径为0.65的高倍镜时,它能辨别两点之间的距离为 0.42μm;而使用数值孔径为1.25的

    油镜时,能辨别两点之间的距离则为0.22μm。选用香柏油是因为它的折射率是

    1.515

    4、显微镜有哪几种?各自的主要特征是什么?

    答:光学显微镜中除明视野显微镜外,还有暗视野显微镜、相差显微镜和荧光显微镜;除光学显微镜外,还有电子显微镜。

    暗视野显微镜:在普通光学显微镜载物台下安装一个暗视野聚光器即成暗视野显微镜。

    相差显微镜:相差显微镜成像的原理和普通光学显微镜一样,所不同的是相差显微镜包括有环状光阑、装有相板的相差物镜和全轴调整望远镜三个特殊部分。

    荧光显微镜:荧光显微镜的主要特征是以紫外线为光源,当照射到用荧光素标记的细菌时,荧光素吸收了紫外线的能量后,再发射出可见的橙、黄、浅绿色荧光。由于用荧光素标记的菌体各种结构中的溶解、吸附或化合情况不一,于是发出不同色调和亮度的荧光,从而可以观察细菌的不同结构。

    电子显微镜:电子显微镜的基本结构和工作原理与普通光学显微镜非常相似,不同的是用电子流代替光线,用电磁圈代替透镜聚焦。

    第二部分:细菌形态学检查方法

    一、目的要求

    1、 了解不染色标本检查法,用悬滴法观察活细菌及其动力。

    2、 熟悉染色标本的制备过程,掌握革兰氏染色法及其结果判断,了解革兰氏染

    色法原理。

    3、 了解其它常用染色法。

    二、实验原理

    检查细菌形态的主要工具是显微镜,可根据不同目的将细菌染色或不染色进行镜检。常用的碱性染料有结晶紫、美蓝、碱性复红等。

    染色法又分单染色法和复染色法两大类。单染色法即仅用一种染料着色,所有的细菌均被染成一种颜色,无鉴别细菌的作用。复染色法又称鉴别染色法,通常用二种或二种以上的染料着色,由于不同种类的细菌或同种细菌的不同组成结构对染料有不同的反应性而被染成不同的颜色,从而有鉴别细菌的作用。

    2、 最常用的细菌复染色法是革兰氏染色法(Gram stain)。通过革兰氏染色法操作,可把细菌分成两大类:革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌。凡能使第一种染料结晶紫保留蓝色的细菌叫革兰氏阳性细菌,凡被洒精脱色后染上对比颜料沙黄或稀释复红而呈红色的细菌叫做革兰氏阴性细菌。

    三、实验内容

    (一)染色标本的制备及观察

    1、复染色法(革兰氏染色法)

    材料:葡萄球菌琼脂培养物1支

    大肠杆菌琼脂培养物1支

    革兰氏染液一套:结晶紫、95%酒精、路哥氏碘液、稀释复红各1瓶。玻片,接种环,酒精灯,吸水纸等。

    方法:

    (1)涂片用葡萄球菌和大肠杆菌混合涂片。

    ① 取玻片一块,拭净。

    ② 用无菌接种环取生理盐水一滴,放在玻片中央(如被检材料是液体,可不加

    生理盐水)。

    ③ 左手斜持菌种试管,右手将菌种试管棉塞稍加转动,以便拔下。

    ④ 右手持接种环,经火焰灭菌后,用右手小拇指拔开菌种试管棉塞,试管口通过火焰,将接种环插入试管中取菌少许(切不可多,更不可将培养基刮下)。 ⑤ 试管口再通过火焰,塞好棉塞。

    ⑥ 将接种环上的细菌加入玻片上之水滴内,磨匀,涂成直径为1cm大小的薄菌膜。

    ⑦ 接种环经火焰灭菌。.

    (2)干燥涂片置于空气中,使其自然干燥。

    (3)固定干燥后将涂片在火焰上缓缓通过三次,此为“固定”。目的是使细

    菌粘于玻片上,染色和水冲时不易脱落;且细菌为蛋白质,被热凝

    固可保持完整形态。

    (4)染色初染→媒染→脱色→复染

    ① 加结晶紫染液于标本上,使其覆满标本,染1~2分钟。

    ② 细水冲洗。

    ③ 加路哥氏碘溶液经1分钟。

    ④ 水洗。

    ⑤ 加95%酒精于玻片上来回流动,倾去酒精。如此重复2~3次(约30秒钟)。 ⑥ 水洗。

    ⑦ 加稀释复红染液,染约1分钟。

    ⑧ 水洗,用吸水纸吸干。

    (5)镜检革兰氏阳性菌在结晶紫着色后不易被酒精脱色,故仍为深蓝色或紫

    色;革兰氏阴性菌在结晶紫着色后易被酒精脱色,故经稀释复红复

    染后成红色。

    三、实验记录

    革兰氏染色过程:取玻片一块,在玻片上滴三小滴水(有一定的距离),分别用接种环取EC(大肠杆菌)和BS(金黄色葡萄球菌)与两边的滴上,并混匀,灼烧接种环后再分别取EC和BS于中间的水滴上混匀(即中间水滴是两种菌的混合物),并在酒精灯下灼烧至干(小心不要将玻片炸裂),用结晶紫进行初染,细水冲洗后,加路哥氏碘液进行媒染,水洗后加酒精脱色2~3次,水冲洗后加稀释复红染液复染一分钟,水洗,并用吸水纸吸干。

    大肠杆菌为革兰氏阴性菌,染色后呈紫红色。普葡萄球菌为革兰氏阳性菌,染色后呈现蓝紫色。

    以下为实验观测图:

    四、思考题 1.染色法在微生物学上有何实际意义?

    染色法可以更方便的观察细菌的具体形态,更方便观察细菌,革兰氏染色法有更重要的意义,可以鉴别细菌,把众多的细菌分为两大类,革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌,在实验方面,可以通过杀死阳性或阴性菌而得到目的菌。

    2.比较复染色法与单染色法的优缺

    细菌的培养实验报告

    点。

    答:单染色法:

    优点:仅用一种染料着色,所有的细菌均被染成一种颜色,简单方便,可用来观察细菌的形态和排列方式。

    缺点:但无鉴别细菌的作用。

    复染色法:

    优点:用二种或二种以上的染料着色,由于不同种类的细菌或同种细菌的不同组峁苟匀玖嫌胁煌姆从π远蝗境刹煌难丈佣屑鹣妇淖饔谩

    缺点:使用试剂较多,过程较单染色法更复杂繁琐。

    3.以革兰氏染色法为例,说明它至少要涉及几种试剂?各起何作用?

    答:至少用到4种试剂。结晶紫溶液进行初染,哥氏碘液进行媒染,95%酒精进行脱色,稀释复红染液进行复染。

    4.要确证一个未知细菌的革兰氏染色性质,你可用什么方法来说明你的结果是可靠的?

    答:

    通过在显微镜下的菌体被染的颜色可以判断,

    凡能使第一种染料结晶紫保留蓝色的细菌为革兰氏阳性细菌,凡被洒精脱色后染上对比颜料沙黄或稀释复红而呈红色的细菌为革兰氏阴性细菌。

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